siRNA抑制外源绿色荧光蛋白在neuro-2a细胞株中的表达

目的：用RNAi技术抑制哺乳动物神经元中外源报告基因的表达，并探讨该过程中RNAi的时间及剂量效应，为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供参考。方法：采用神经细胞来源的细胞系neuro-2a小鼠神经瘤细胞为模型，将外源绿色荧光蛋白（GFP）基因转染到neuro-2a细胞内，利用体外转录法合成siRNA，分为3个剂量组对其进行干扰。结果：Neuro-2a细胞可以被有效地转染，而且siRNA在neuro-2a细胞内可以有效发挥干扰作用。这种干扰作用呈现出一定的剂量效应。结论：RNAi技术可以成功用于neuro-2a细胞抑制基因的表达，这种对GFP表达规律及RNAi剂量效应的研究为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供了一定的理论参考和依据。     

CD83 expression on dendritic cells and T cells: correlation with effective immune responses

Human CD83 is a marker molecule for mature dendritic cells (DC) and is also expressed on activated B and T cells. Although CD83 has been implicated in immune responses, its function on DC and T cells remains unclear. In this study, we wanted to assess the role of CD83 expressed on DC and T cells in the immune response. Down-regulation of CD83 expression on human DC through RNA interference (RNAi) results in a less potent induction of allogeneic T cell proliferation, reduced IFN-gamma secretion by established T cells and decreased capacity in the priming of functional tumor antigen-specific CD8+ T lymphocytes. In addition, CD83 mRNA-electroporated DC are stronger T cell stimulators. However, CD83 overexpression on Melan-A/MART-1-specific tumor-infiltrating lymphocytes (TIL) circumvents the need for CD83 expression on DC. Co-culture of immature DC with TIL or K562 cells overexpressing CD83 results in the production of enhanced levels of pro-inflammatory cytokines, whereas this production is less pronounced or even absent in co-cultures with non-modified TIL or K562 cells. In conclusion, we demonstrate that CD83 expression on T cells and DC modulates the immune response by activating DC and by delivering costimulatory signals for the stimulation of naive and memory T cells, respectively.     

四种中药注射液对常用生化检验项目的分析干扰筛选

目的 探讨丹红注射液、丹参酮Ⅱa磺酸钠注射液、灯盏花素注射液、喜炎平注射液对常用生化检验项目是否存在体外分析干扰.方法 收集当日我院体检中心3口内未服用任何药物的健康体检者混合血清做基础样本,取基础样本20倍稀释四种药物原液作为实验样本.取基础样本20倍稀释注射用水做对照样本,分别测定丙氨酸氨基转移酶(AST)、天门冬氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿素(UREA)、肌酐(CREA)、尿酸(UA)、总胆固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)a-羟丁酸脱氢酶(a-HBDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB),通过计算得出4种药物对各检验项目是否存在干扰可能.结果 四种药物中丹红注射液对生化项目UREA、CREA、UA、TG、TCHO、HDL-C、a-HBDH、LDL-C、CK、CK-MB存在分析干扰可能,丹参酮Ⅱa磺酸钠注射液对实验中的生化项目不存在分析干扰可能,喜炎平注射液对生化项目LDH存在分析干扰可能,灯盏花素注射液对生化检验项目CREA、UA、TG、TCHO、HDL-C、LDL-C、LDH存在分析干扰可能.结论 四种中药注射液中丹红注射液、喜炎平注射液和灯盏花素注射液对部分生化检验项目存在干扰可能.     

Noise Mode Response at Peak Exercise in a DDD Pacemaker

The noise sampling period has been recognized as a cause of apparent sensing malfunction in demand pacemakers. Physiologic signals as well as external electromagnetic interference can cause certain demand pacemakers to remain refractory and escape asynchronously at a specified rate. In this case, noise mode reversion pacing at the programmed lower rate limit of a Cordis 415A DDD pacemaker was observed during exercise when P-waves fell within the noise sampling period.     

结合QRS检测和小波阈值的膈肌肌电信号降噪方法

为了消去夹杂在膈肌肌电(EMGdi)信号中的心电干扰,在比例阈值算法的基础上,提出一种结合QRS检测和小波阈值的降噪方法.首先,根据小波系数的相关性构造QRS波群的检测方法,分析确定干扰的位置和范围;其次,将小波系数分为受干扰和未受干扰两部分,并构造相应的阈值算法,针对性地处理受干扰系数,以未受干扰部分系数作为阈值算法构造的依据;最后,重构处理后的小波系数,得到降噪后的EMGdi信号.对临床采集信号的处理对比表明,该方法能够更为有效地去除心电干扰,并更好地保留EMGdi的有用信号.     

利用RNAi技术抑制结肠癌NRF2基因表达

目的构建RNA干扰真核表达载体pSUPER-NRF2,并在结肠癌细胞中进行表达,验证NRF2基因表达是否受到抑制。方法设计特异性针对NRF2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列,分别构建重组载体并转染人结肠癌Caco-2细胞。同时转染pEGFP-N1质粒,通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测绿色荧光来监测转染效率,共转染pEGFP-N1 48 h后G418筛选稳定表达的细胞。利用RT-PCR和W estern b lot检测瞬时及稳定转染细胞NRF2基因的表达。结果成功构建RNA i真核表达载体。转染pEGFP-N1后48 h达转染效率高峰。瞬时及稳定转染pSUPER-NRF2-A2、B2重组质粒NRF2 mRNA的表达无差异;转染48 h后,pSUPER-NRF2-A1、B1可显著抑制NRF2 mRNA的表达;pSUPER-NRF2-B1稳定转染后,NRF2 mRNA的表达也显著降低。瞬时和稳定筛选后NRF2蛋白表达亦显著降低。结论成功构建了NRF2的RNA i表达载体,可有效抑制靶基因表达,共转染带有筛选标记的pEGFP-N1质粒,筛选可获得低表达NRF2的稳定克隆,为进一步研究NRF2在结肠癌发生、发展中的作用提供了重要的实验材料。     

HLCDG1基因siRNA表达质粒的构建及其对A549细胞周期和增殖的影响

目的:本研究旨在应用RNA干扰技术，诱导转基因肺癌细胞HLCDG1基因沉默并观察其对肺癌细胞周期和增殖的影响。 方法:构建HLCDG1基因短小干扰双链RNA表达载体，筛选HLCDG1基因表达沉默的肺癌细胞株并应用MTT和流式细胞仪分析这一肺癌细胞株增殖和细胞周期分布状况。 结果:根据siRNA表达载体的设计原则，构建了能在哺乳动物细胞稳定表达的siRNA载体5个（4个位点匹配实验组和1个位点错配对照组），依次命名为pHL-si-1、pHL-si-2、pHL-si-3、pHL-si-4 和 pHL-si-c。上述载体分别与表达HLCDG1的重组体pcDNA3.1(+)/HLCDG1共转染A549细胞，筛选到一株共转染pHL-si-1载体和pcDNA3.1(+)/HLCDG1重组体的A549细胞，它几无HLCDG1基因表达，这株细胞暂命名为A549-HLCDG1-si-1。MTT和流式细胞仪分析表明，A549-HLCDG1-si-1细胞增殖能力明显提高，进入S期和G2+M期增多，滞留G1期减少。 结论:采用RNAi技术特异阻断HLCDG1基因表达，验证了HLCDG1基因对A549肺癌细胞有生长抑制作用。     

沉默NF-κB p65基因下调TNF-α诱导的肺泡上皮细胞的炎症反应

目的建立急性肺损伤体外细胞炎症模型,探讨NF-κB p65基因沉默减轻细胞炎症、保护肺结构细胞的可行性。方法以TNF-α(10 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549),运用RNA干扰技术沉默NF-κB p65基因,采用RT-PCR及Westernblotting法检测沉默效率,ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β、IL-8、IL-10等炎症因子浓度。结果 TNF-α刺激A549细胞可在基因水平上调NF-κB p65的表达,并增加NF-κB蛋白的核转位,上调细胞培养上清中IL-1β、IL-8、IL-10的浓度;预转染NF-κB p65 siRNA可在基因水平及蛋白水平有效沉默NF-κB p65表达,降低上述各炎症因子浓度(P<0.05)。结论急性肺损伤体外细胞炎症模型构建成功,RNA干扰技术能有效沉默该模型NF-κB p65基因,下调炎症反应水平,保护肺泡上皮细胞,为急性肺损伤免疫调控机制的研究和基因靶向治疗提供实验依据。     

锌指转录因子Snai1通过E-钙黏蛋白调控胃癌侵袭及淋巴结转移

目的 探讨锌指转录因子Snai1在胃癌发生发展中的作用,以及胃癌组织中Snai1与E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达的关系.方法 收集本院普外科2010年1月至2012年1月收治的65例胃癌患者手术切除的胃癌组织及邻近的正常胃黏膜组织,免疫组织化学检测Snai1和E-cadherin的表达.体外培养人胃腺癌细胞株SGC-7901,分为3组：空白对照组不进行转染,阴性对照组转染不含靶向作用于Snai1的siRNA的空质粒,转染组转染靶向作用于Snai1的siRNA.转染结束后实时定量PCR和免疫印迹法检测3组细胞Snai1和E-cadherin的表达.结果 胃癌组织中Snai1表达阳性率较正常胃黏膜组织明显增高（58.5％比0.0％,P＜0.001）,而E-cadherin表达阳性率明显降低（43.1％比100.0％,P＜0.001）.Snai1阳性和阴性的胃癌组织中E-cadherin表达的阳性率分别为28.9％ （11/38）、63.0％（17/27）.Snai1阳性的胃癌患者较Snai1阴性的胃癌患者淋巴结转移率明显升高（78.9％比40.7％,P＜0.001）.体外细胞实验显示,空白对照组与阴性对照组比较,Snai1和E-cadherin的表达差异无统计学意义（均P＞0.05）;与空白对照组比较,转染组Snai1 mRNA和蛋白表达下调,而E-cadherin mRNA和蛋白表达上调（均P＜0.05）.结论 Snai1可通过抑制E-cadherin表达,促进胃癌发生局部浸润及淋巴结转移.